脈動真空滅菌滅菌效果驗證

備注說明 ：下面滅菌效果驗證中使用的 3 種無菌檢驗用培養(yǎng)基分別按各自培養(yǎng)基的使用說明配制并分裝在 6 分管中，每支分裝 6mL~8mL，蓋上膠塞經(jīng) 116℃，1800s 高壓滅菌后無菌檢驗合格備用。

方法一 ：無菌（純粹）檢驗法

檢驗過程：將高壓滅菌后的 MEM 溶液（在室溫放置 24h，然后移至層流罩（局百環(huán)境）下用 5mL 無菌注射器取樣，并分別接種硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 2 支、胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基1 支和酪胨瓊脂培養(yǎng)基 2 支，每支接種 0.2mL，分別在 25℃（硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基、胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基和酪胨瓊脂培養(yǎng)基各一支）和 37℃（硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和酪胨瓊脂培養(yǎng)基各一支）條件下培養(yǎng) 7 天，每天觀察并記錄檢驗結(jié)果。檢驗結(jié)果 ：觀察 7 天，無菌檢驗培養(yǎng)基中均無菌落生長，無菌檢驗合格。

方法二 ：細胞培養(yǎng)檢驗法

檢驗過程：在高壓滅菌后的 MEM 溶液中加 10% 胎牛血清后貼壁培養(yǎng) MDBK 細胞，并 37℃培養(yǎng) 3 天，每天觀察細胞是否染菌。檢驗結(jié)果：3 天后細胞生長良好，顯微鏡鏡檢細胞輪廓清晰，視野干凈，未見雜菌。

方法三 ：生物指示劑驗證法

在高壓滅菌 MEM 溶液時選擇 3 個溫度可能最低的點分別放置生物指示劑 , 常用的生物指示劑嗜熱脂肪芽孢桿菌Bacillusstereathernophilus，其常規(guī)微生物耐熱參數(shù) D 值為 121℃（1.5min~3.0min）。一同滅菌，滅菌結(jié)束后將滅菌后的生物指示劑及時取出并置于 56℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 48h，隨后取出培養(yǎng)后的生物指示劑，觀察安瓿的內(nèi)容物顏色，并與生物指示劑照片進行比較觀察。檢驗結(jié)果 ：48h 培養(yǎng)后的生物指示劑顏色呈紫紅色且澄清，說明該滅菌過程可有效殺滅孢子菌。

驗證結(jié)果重復(fù)上述驗證，連續(xù)三次，結(jié)果均符合要求。